Producción de los reactivos primarios de un sistema inmunoenzimático ELISA para determinar lipoproteína (a) / Production of primary reactives of an ELISA immunoenzymatic system to determine lipoprotein (a)

El objetivo de nuestro trabajo fue desarrollar la metodología y la producción de los reactivos primarios para realizar un método inmunoenzimático (ELISA) tipo sandwich para determinar lipoproteina (a) en suero humano. La concentración final del antisuero policlonal antiapolipoproteína (a) (anti-apo [a]) obtenida fue de 1,3 mg/dL, purificado, por cromatografía de afinidad y de intercambio iónico. El antisuero antilipoproteína de baja densidad (anti LDL) de carnero purificado por cromatografía de afinidad fue utilizado en la obtención del conjugado policlonal perxodasa-IgG anti-LDL. La concentración óptima de recubrimiento con anti-apo (a) fue de 2 µg/mL y la dilución óptima del conjugado fue 1/7000, con lo cual obtuvimos una sensibilidad alta del ensayo. Poder producir en nuestro laboratorio reactivos primarios para el desarrollo de un sistema inmunoenzimático de determinación de Lp (a) hace posible la accesibilidad de la determinación con fines asistenciales e investigativos, así como un ahorro en moneda libremente convertible, pues estos reactivos tienen un elevado costo en el mercado

La terapia hormonal sustitutiva modifica la composición en ácidos grasos de fosfolípidos de HDL / Hormone replacement therapy modifies the fatty-acid composition of HDL phospholipids

Las mujeres postmenospáusicas tienen un riesgo aumentado de padecer enfermedad coronaria en comparación con las premenospáusicas. Sin embargo, el riesgo disminuye cuando se realiza terapia hormonal sustitutiva. El objetivo de este estudio es investigar el posible efecto de la terapia con 17 ß Estradiol (E2) o de la combinación de 17 ß Estradiol y Acetato de Medroxiprogesterona (AMP), sobre las concentraciones plásmicas de colesterol total, colesterol HDL, colesterol LDL, colesterol VLDL y triglicéridos, fracciones de conocida participación en la aterogénesis. También se estudió la composición de ácidos grasos de fosfolípidos de la fracción no retenida obtenida por cromatografía de afinidad con Concanavalina A. Al cabo de 30 días de tratamiento con E2, el colesterol total disminuyó desde 226,0 ñ 54,4 mg/dl hasta 202,0 ñ 51,7 mg/dl; los niveles de triglicéridos descendieron desde 106,3 ñ 31,3 mg/dl hasta 80,6 ñ 13,9 mg/dl (p < 0,05), posiblemente a expensas de la fracción VLDL (21,3 ñ 6,2 mg/dl vs. 16,9 ñ 2,5 mg/dl); los fosfolípidos de la fracción no retenida de Concanavalina A mostraron una disminución de los ácidos grasos mirístico, palmítico y esteárico, y un aumento concomitante de los ácidos grasos oleico y linoleico. Los cambios observados con la administración de E2 tendieron a anularse cuando se agregó Acetato de Medroxiprogesterona

Partículas lipoproteicas: concepto, aislamiento e implicancias clínicas / Lipoprotein particles: concept, isolation and clinical significance

La utilización de la cromatografía de afinidad con concanavalina A o de cromatografía de inmunoafinidad con anticuerpos anti apoB permite obtener dos grupos de lipoproteínas: las que contienen apoA y las que contienen apoB. El subfraccionamiento por cromatografía de inmunoafinidad secuencial de las partículas lipoproteicas que contienen apoA permite obtener a su vez tres mayores partículas lipoproteicas: LP-A-I, LP-A-I:A-II y LP-A-II. El subfraccionamiento a través de inmunoprecipitación secuencial o cromatografía de inmunoafinidad secuencial de las partículas lipoproteicas que contienen apoB permite obtener cinco mayores grupos de partículas: LP-B, LP-B:C, LP-B:E, LP-B:C:E y LP-A-II:B. La diferencia entre normo e hiperlipoproteinémicos sería el resultado de cambios cuantitativos (y no cualitativos) de las partículas lipoproteicas. En hipercolesterolémicos se destaca un aumento de LP-B en tanto que en hipertrigliceridémicos aumentan la LP-B-C y LP-B:C:E. Las drogas hipolipemiantes, independientemente de su mecanismo de acción, afectan en diferentes sentidos las concentraciones de las partículas lipoproteicas que contienen apoA y apoB. Bajas concentraciones de LP-A-I y elevadas de LP-B:C y LP-B:C:E se asocian con riesgo aterogénico

Anticuerpos monoclonales para la cuantificación de apolipoproteína A1 / Monoclonal antibodies for quantitation of apolipoprotein A1

Se describe la producción de anticuerpos monoclonales (AcMs) de ratón contra la apolipoproteína A1 (APO A1), a partir de la inmunización de ratones BALB/c con APO A1 purificada de plasma humano. Los anticuerpos obtenidos son de la clase IgG1 y fueron purificados a partir de líquido ascítico mediante cromatografía de afinidad con Proteína A Sepharosa. Dos de ellos, que reconocen sitios diferentes de la molécula de APO A1 en muestras de suero. Los coeficientes de variación intra e interensayo fueron de 3,4 y 10 % respectivamente. Con este sistema se detectaron niveles disminuídos de APO A1 en pacientes con infarto agudo del miocardio entre 45 y 80 años, y en grupo con aterosclerosis periférica entre 40 y 49 años, con relación a sujetos controles de igual rango de edad. En los pacientes con aterosclerosis periférica de mayor edad (entre 60 y 80 años), aunque se encontraron valores de APO A1 más bajos que el grupo control respectivo, esta diferencia no fue estadísticamente significativa